外泌体是细胞主动分泌到胞外的用于细胞间通讯的天然载体，由于其具有免疫源性低、穿透性高、可工程化修饰、能装载核酸和蛋白等不同类型药物等诸多优势，被评为新一代药物递送平台。工程化外泌体正在成为小核酸分子的重要载体。为了实现基于外泌体的小核酸递送目的，现有内源表达、电穿孔和化学转染为主的外源装载等不同的技术路线。

恩泽康泰开发的ExoLoad^®试剂盒是通过定制开发针对外泌体的专属转运肽ETP（Exosome-Transit Peptide）将siRNA、microRNA、ASO等小核酸高效导入外泌体中，可方便快速实现外泌体小核酸的高效装载，用于小核酸递送的功能研究以及药物治疗研究。

小核酸如ASO、siRNA和miRNA等装载至外泌体中，用于目的小核酸的递送或功能机制研究。

1. 便捷：无需特殊设备，全程仅需3h即可完成装载，动手时间不超30min；

2. 通量大：单次反应最高可负载9E+12 particles的外泌体；

3. 载量高：外泌体装载效率高达500 copies/外泌体，与电转相当；

4. 效果好：测试结果显示负载外泌体对受体细胞的递送率高达99%，可有效调控受体细胞的靶基因表达；

5. 安全：对受体细胞安全性能好；

6. 应用范围广：可兼容ASO、miRNA、siRNA等不同类型小核酸；

7. 权威：有效辅助客户文章发表，获得用户广泛好评。

ExoLoad^®对外泌体的形貌、尺寸和标志蛋白均不会产生影响。

ExoLoad^®可有效装载ASO、miRNA、siRNA等不同类型小核酸，载量媲美电穿孔。

ExoLoad^®负载后的外泌体具有极高的核酸递送效率。

ExoLoad^®负载后的外泌体可有效调控受体细胞的靶基因表达。

ExoLoad^®负载的外泌体对细胞未展示出毒副作用。

Q：负载后的外泌体，保存条件及稳定性？

A：建议4℃放置3天内，最多不能超过7天。

Q：试剂盒保质期及转运肽溶解后的保质期？

A：试剂盒保质期一年，建议在有效期内使用，转运肽溶解后4℃一年内稳定。

Q：跟脂锚联用的推荐操作方法？

A：建议先进行脂锚，后进行ExoLoad^®。

Q：ExoLoad^®负载在外泌体表面还是内部？

A：表面、内部都会有，但是目前技术手段无法做出评估。

Q：细胞导入小核酸可以用ExoLoad^®么？有相关实验数据吗？

A：这不是我们产品关注的方向，暂无相关实验数据，理论上可行，但是不清楚ExoLoad®里面会不会有杂质影响细胞。

Q：长链RNA或circRNA的装载是否可以用ExoLoad^®？

A：ExoLoad^®小核酸负载试剂盒是专门用来在外泌体中装载18-30nt的小核酸的，长链mRNA外源装载我们正在开发相关试剂盒，目前性能良好。更多的lncRNA或circRNA装载，目前我们没有测试过，可能效果不佳，有兴趣老师可以自行测试，操作方便出结果也很快可以快速试错。

Q：储存温度和运输温度？

A：运输是冰袋，短期可暂放4℃，如果长期可根据说明书建议条件进行存放。

Q：大包装的一定能处理30只小鼠吗？

A：我们大包装的规格是1.5E+12*6T，外泌体的投量是9E+12particles，按照1/3回收效率可以拿到3E+12 particles外泌体，每只鼠的处理剂量约1E+11，这个换算的话可以拿到处理30只小鼠的量。具体处理小鼠的量可以根据客户的处理剂量在这个范围上下波动。

Q：我的外泌体不是293来源，也可以用这款试剂盒吗？

A：首先，可以肯定的是我们不同客户使用反馈都非常好，他们的外泌体来源存在非常多的种类差异。其次，不可否认不同来源外泌体的负载效率会有差异，就像负载不同的小核酸一样，负载效率不会完全一样。再次，从原理上，不同来源的外泌体虽然都是双层膜结构，所带电荷会略有差异，但都呈负电，所以负载效率会有差异，但ExoLoad^®仍可发挥负载的功能。最后，基于相同原理的负载，有文章比较过MSC外泌体、尿液外泌体和牛血清外泌体的负载差异，qPCR检测结果相差较大，但都能够将miRNA负载进外泌体中。

Q：试剂盒的回收率有多少？

A：我们的正装(ELSR-06-02、ELSR-06-03)中会赠送密理博的100KD超滤管，用超滤来回收，根据外泌体纯度不同回收率会有差异，我们的每次回收率基本维持在30-40%。

Q：试剂盒有没有发过文章？

A：参考文献：PMID36913799。

1. Mi L, Gao J, Li N, et al. Human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes loaded miR-451a targets ATF2 to improve rheumatoid arthritis. Int Immunopharmacol. 2024;127:111365.

2. Shen K, Wang X, Wang Y, et al. miR-125b-5p in adipose derived stem cells exosome alleviates pulmonary microvascular endothelial cells ferroptosis via Keap1/Nrf2/GPX4 in sepsis lung injury. Redox Biol. 2023;62:102655.  文献解读请参考：干细胞外泌体miR-125b-5p减轻脓毒症肺损伤肺微血管内皮细胞PMVEC铁死亡。